U2OS细胞的培养
本发明构建了能稳定表达C-Myc-ER融合蛋白的U2OS细胞株。C-Myc作为一个癌基因，同时又是一个转录因子，能够调控细胞内15%的基因转录，参与到细胞内的很多生命活动中，比如细胞增殖、凋亡、等过程，也涉及到肿瘤的发生和进展等病理过程。该细胞可以通过加入4-OHT，激活C-Myc发挥转录因子活性。
细胞培养
病毒包装细胞Plat-E细胞，骨肉瘤U2OS细胞，培养于DMEM培养基中（含10 %肽牛血清、100 U/ml青霉素、100 ug/ml链霉素），将培养瓶放置于37°C、5 % CO2饱和湿度培养箱中培养，每1-2天更换培养基一次。当细胞生长到覆盖瓶底壁80 %时，用0.25 %胰蛋白酶消化贴壁细胞，传代后继续放置于培养箱中。
重组质粒构建
C-Myc-ER基因片段合成，经PCR扩增后，用BamH I和EcoR I双酶切PCR产物和pBABE质粒，然后用T4连接酶连接片段和质粒，置于12°C过夜，**天用感受态细菌E.coli DH5α转化，涂抹于含青霉素（100 ug/ml）的LB琼脂糖培养板，置于37°C培养箱培养12-14小时，挑取单克隆，用含青霉素的LB培养液中培养12-14小时，转速为280 rpm，培养温度为37 °C。用质粒小提试剂盒提取质粒后用BamH I和EcoR I酶切鉴定并送测序。
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