细胞培养技术服务
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服务编码
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项目名称
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项目报价
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项目周期
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BT5001
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细胞培养
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2000元
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1-2周
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BT5002
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细胞瞬时转染
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3000元
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1-2周
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BT5003
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稳定细胞系构建
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咨询
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咨询
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一、服务内容
1、细胞转染和稳定表达细胞株筛选
通过转染试剂或电穿孔方式等方式，将目的基因导入贴壁细胞或悬浮细胞24-48小时后，目的基因即在细胞内表达。此时为了建立稳定细胞系，可根据不同基因载体中所含的抗性标记，选用相应的药物对靶细胞进行筛选，从而得到稳定表达外源基因的细胞克隆。观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能（短时间即可进行观察，但效应会很快丢失）。
2、针对不同种类细胞使用药物，低氧，压力等外源因素进行刺激等处理，建立相关的细胞模型，从而进行后续的研究工作。
二、样品要求（样品处理及保存见附件）
1干冰运输：取对数生长期的细胞，消化后低速离心1000rpm，5min收集细胞，加入适量配制好的冻存液后吹打均匀。将细胞分装入冻存管中，标明细胞的名称、细胞代次、冻存时间及操作者；放4℃冰箱30min，-20℃30min到1h，-80℃过液，然后放入液氮罐；细胞数目不少于5×106/ml；
2常温运输：细胞贴壁覆盖瓶底面积达40%以上时，装满培养液，瓶口用封口膜封好，装入盒子，盒子里用泡沫或棉花塞满，让瓶子固定在盒子中。
三、服务特点
1、针对不同细胞系筛选合适的转染试剂和质粒浓度配比，提高转染效率和蛋白表达量
2、丰富的抗生素筛选经验和单细胞克隆鉴定方法提高实验效率
3、构建的稳定表达细胞株可稳定传代，极少发生性状丢失
四、收费标准
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服务项目
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收费标准￥
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实验周期
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蛋白瞬时表达或敲低
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基因表达或敲低载体构建
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请参见载体构建目录
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2-3周
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质粒大提（含去内毒素）
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700/质粒
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1周
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载体转染
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3000/样品
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1周
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Western Blot检测蛋白表达或敲低
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2000/目的蛋白/膜
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2周
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蛋白稳定表达细胞株构建（混合克隆）
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表达载体构建
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请参见载体构建目录
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2-3周
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质粒大提（含去内毒素）
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700/质粒
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1周
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转染和抗生素筛选
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40000/细胞系
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3-4周
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Western Blot检测稳定细胞株蛋白表达
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2000/目的蛋白/膜
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2周
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蛋白稳定表达细胞株构建（单克隆）
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表达载体构建
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请参见载体构建目录
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2-3周
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质粒大提（含去内毒素）
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700/质粒
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1周
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转染和抗生素筛选
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50000/细胞系
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6-8周
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Western Blot检测稳定细胞株蛋白表达
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2000/目的蛋白/膜
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2周
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蛋白敲低细胞系构建（单克隆）
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shRNA表达载体的构建
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请参见载体构建目录
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2-3周
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质粒大提（含去内毒素）
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700/质粒
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1周
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转染和抗生素筛选
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60000/细胞系
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6-8周
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Western Blot检测敲低细胞株蛋白表达
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2000/目的蛋白/膜
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2周
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蛋白真核表达（分泌表达）
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分泌型表达载体的构建
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请参见载体构建目录
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2-3周
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质粒大提（含去内毒素）
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700/质粒
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1周
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细胞转染
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3000/质粒
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2周
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蛋白表达检测（Western Blot或 ELISA）
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2000/目的蛋白/膜；600/板
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2周
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蛋白表达和纯化
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20000/mg
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2周
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五、客户提供材料
1、待克隆基因和载体信息，待敲低基因信息和shRNA序列信息（如无相关shRNA序列信息，本公司可代为设计并收取相关费用）；
2、待转染细胞株（如需使用常用肿瘤细胞株，如293/293T、HeLa等可由本公司提供）；
3、阳性对照样品（尽量提供）
4、相关文献（可选）
六、提交给客户结果
1、构建完成的载体和甘油菌株；
2、完整测序报告和序列碱基图
3、载体真核表达鉴定结果
4、载体真核表达蛋白
5、稳定表达细胞株>1×107
6、稳定敲低细胞株>1×107
7、完整实验报告（包括基因扩增图，细胞株过表达和敲低检测结果图等）
