小鼠巨噬细胞分离方法
腹腔中分离
1、小鼠巨噬细胞取6周左右的小鼠(或600克左右的豚鼠,或3公斤左右的家兔),剃去腹部的毛并消毒。腹腔注射1ml(豚鼠20ml,家兔200ml)无菌的液体石蜡或巯基乙酸肉汤或4%淀粉肉汤。3~4天以后收集腹腔细胞。
2、如要收集腹腔静置巨噬细胞,不注射刺激物,直接从一步开始。放血处死动物,以减少腹腔中的红细胞。消毒腹部,沿腹中线注入3~4ml(豚鼠20~40ml,家兔50~70ml)冰中预冷的无菌PBS-H(含10U/ml肝素和10%小牛血清的PBS)。轻轻按摩腹部5分钟。
3、以下均无菌操作。剪开腹壁,用吸管吸出渗出液,再用同样容量的预冷PBS-H冲洗腹腔2~3次。合并渗出液于离心管中,4℃离心250×g10分钟,去上清液。
4、用预冷的RPMI-1640培养液洗涤细胞3次,每次4℃离心250×g10分钟,去上清液。用预冷的适量RPMI-1640培养液悬浮细胞,台盼蓝染色计数细胞并决定细胞活力。
家兔肺泡小鼠巨噬细胞巨噬细胞的分离和纯化
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