Ana-1小鼠巨噬细胞的原代培养及实验步骤
(1) (Ana-1小鼠巨噬细胞)实验开始前向小鼠腹腔注射0.5ml含40μg刀豆球蛋白a的磷酸盐缓冲液（PBS）。
(2) 3天后，断颈处死小鼠，75%酒精消毒小鼠皮肤。
(3) 置动物于解剖台上，用针头固定四肢，双手持镊撕开皮肤拉向两侧，暴露出腹膜，但勿伤及腹膜壁。
(4) 再用70％酒精擦洗腹膜壁后，用注射器吸10ml 无菌PBS液注入腹腔中，同时从两侧用手指揉压腹膜壁，令液体在腹腔内充分流动。
(5) 用针头轻轻挑起腹壁，使动物体微倾向一侧，使腹腔中液体集于针头下吸取入针管内。
(6) 小心拔出针头，把液体注入离心管中，1000r/min 4℃离心10分钟，弃去上清液，重复两次，加入完全培养液重悬。
(7) 将滤液进行台盼蓝拒染试验,(Ana-1小鼠巨噬细胞)血细胞计数板镜下计数。以 8.0 ×104至 1.0 ×105/mL的密度将细胞以 400µl/孔接种到预先用L-多聚赖氨酸包被的24 孔培养板或 100µl/孔接种 96 孔培养板。
(8) 用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基培养，细胞培养24-48 h直到融合。
注意事项：
腹腔注射时PBS可以用20ML注射器，每只老鼠注射10ML；切勿注射入内脏，会使腹腔液中红细胞增多，同时可能污染；注射后，要多揉一下再取液；
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