大鼠心肌细胞分离和消化
心肌细胞分离
根据心肌细胞和非(大鼠心肌细胞)心肌细胞贴壁时间的不同采用2小时差速贴壁，分别获得心肌成纤维细胞和心肌细胞。心肌细胞按1*106个细胞/ml种于50ml培养液中，培养的前2天在心肌细胞培养液中加入5-溴脱氧嘧啶核苷0.1mmol/l，以抑制非心肌细胞增殖，所有培养的心肌细胞均每2天换液一次。
心肌细胞的消化
取一只加盖烧杯，内放一块用乙醚饱和的纱布，把0~3日龄的(大鼠心肌细胞)大鼠幼鼠放进该烧杯中麻醉，用2%碘酒和75%酒精消毒胸腹皮肤，在无菌条件下开胸取出心脏，立即置于4ºCD-Hanks液(mmol/L：Nacl137,Kcl5.4,Na2HPO40.37,K2HPO40.44,NaHCO34.2)中剪取心室肌，洗净残血，剪成约1mm³大小的组织块，弃去D-Hanks液加入0.08%胰蛋白酶液10~15ml，于37°C静置5min，吸出上层悬液，并加入等量的含血清培养基。经终止消化后离心(1800r/min)弃上清液，加入含血清的培养液。吹散沉淀细胞，同条件下离心，用10%血清培养液制成细胞悬液，置于37°C含5%CO2培养箱中。
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