Immortalized Rat Conjunctival Epithelial Cells (CJ4.1A) - SV40

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BioSafety Level	II
Organism	Fischer 344 Rat
Source Organ	Eye
Growth Properties	Adherent
Morphology	Epithelial
Recommended Seeding Density	Thaw entire contents into an appropriate T25 flask as specified in the Propagation instructions.
Markers	Cytokeratin 4, Cytokeratin 7
Applications	For Research Use Only
Immortalization Method	Immortalization by transfection with SV40 large T antigen
Description	The Immortalized Rat Conjunctival Epithelial Cells (CJ4.1A) were derived from primary conjunctival epithelial cells from Fischer 344 rats. The primary cells were immortalized with pSV(neo) and transfected with SV40 large T antigen. The immortalized cells display epithelial morphology and express the conjunctiva-specific cytokeratin 4, the goblet cell-specific cytokeratin 7 and were negative for the corneal epithelial cell-specific cytokeratin 12. The Immortalized Rat Conjunctival Epithelial Cells (CJ4.1A) is useful as models for studying the conjunctival epithelial barrier and also in developing strategies for delivering macromolecular antigens across this barrier to underlying components of the immune system.
Procedure Overview
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Propagation	Use of PriCoat™ T25 Flasks (G299) or Applied Cell Extracellular Matrix (G422) is required for cell adhesion to the culture vessels. Grow cells in ECM-coated culture vessels with the following conditions. The base medium for this cell line is PriGrow IV medium available from abm (TM004). To make the completed growth medium, add the following components to the base medium: BSA to final concentration of 0.5%, 10 mM HEPES, 1X trace elements B, 10 μg/ml insulin, 5.5 μg/ml transferrin, 50 ng/ml sodium selenate, 20 μg/ml ethanolamine, 0.3 μg/ml glucagon, 0.1 μM dexamethasone, 0.1 μM retinoic acid, 0.3 μM 3, 3’, 5 triiodo-L thyronine, 80 ng/ml epidermal growth factor, 50 μg/ml gentamycin sulfate (Invitrogen-GIBCO) and 1% Penicillin/Streptomycin (G255). Atmosphere: air: 95%, CO₂: 5%; Temperature: 37.0°C.
Subculturing	1. Remove and discard culture medium. 2. Add 2.0mL of Trypsin-EDTA (TM050) solution to flask and observe cells under an inverted microscope until cell layer is dispersed. Note: Cells that are difficult to detach may be placed at 37°C to facilitate dispersal. 3. Centrifuge cells at 1500rpm for 3 minutes to pellet. 4. Aspirate out trypsin, leaving pellet undisturbed. 5. Resuspend pellet in fresh culture medium and plate in new culture vessel. 6. Incubate cultures at 37°C. Be sure to use T25 ECM-coated flasks(G299) for growth.
Preservation	1. Freeze Medium: Complete growth medium with 20% FBS and 10% DMSO. 2. Storage Temperature: Liquid nitrogen vapour phase.
Quality Control	1) Immunofluorescence confocal microscopy demonstrating cytokeratin expression
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