细胞简介：
大鼠肝枯否细胞分离自肝脏组织，肝脏是身体内以代谢功能为主的—个器官，并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分
泌性蛋白质的合成等作用；肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里*大的器官，位于机体中的腹部位置，在
右侧横膈膜之下，位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方，胃的上方。肝脏是机体消化系统中*大的消化腺，为—红棕色
的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官，又是新陈代谢的重要器官。肝脏在机体位置和形态结构：肝脏位于右上腹，
隐藏在右侧隔下和肋骨深面，大部分肝为肋弓所覆盖，仅在腹上区、右肋弓间露出并宜接接触腹前壁，肝上面则与膈及
腹前壁相接。枯否氏细胞(Kupffe细胞）是肝脏的肝血窦内—些固定于窦壁的巨噬细胞，它能吞噬和清除大部分从肠道
来的抗原微粒，并能吞噬和清除肝血窦中的细菌、异物和衰老的红细胞，并把血红蛋白分解成胆红素。此外，肝巨噬细
胞也有处理抗原，诱导T细胞增殖，参与免疫调节的作用。枯否氏细胞和—般巨噬细胞不同，枯否氏细胞不具有增加抗原
免疫原性的能力，相反有消除或减弱抗原性的作用。枯否氏细胞能吞噬来自血液循环的抗原抗体复合物和其他有害物
质，以消除这些物质对机体的损害。枯否细胞功能障碍可导致肠源性内毒素血症。电镜下有很多皱褶和微绒毛。
大鼠肝枯否细胞接受后处理
1) 收到非红系有核细胞后，请检查是否漏液 ，如果漏液，请拍照片发给我们。
2) 请先在显微镜下确认细胞生长 状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3) 弃去T25瓶中的培养基，添加 6ml本公司附带的完全培养基。
4) 如果细胞密度达80%-90%请及 时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。
5) 接到细胞次日，请检查细胞是 否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。
大鼠肝枯否细胞培养操作
1）复苏细胞：将含有细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。**天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
大鼠肝枯否细胞培养注意事项
1. 收到非红系有核细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现 象发生请及 时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所 需细胞因子 等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题，责任由客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶 壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常， 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活 力，请拍下 照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4. 静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待ATCC CRL-1711(Sf9)细 胞汇 合度 80%左右时正常传代。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞 传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和 技术 部 沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联 系，告知细胞的具体情况，以便我们 的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7.该细胞仅供科研使用。
合肥星肽生物科技有限公司作为美国ATCC专业代理商，专业经营ATCC菌种、ATCC原代细胞、培养基、抗体、生物试剂、耗材等，合肥星肽生物科技有限公司与ATCC共同努力致力于为客户提供可靠的研究材料以及方便快捷的服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到*终售后的确保项目准确到位，都有相关专业人士进行维护,确保您在合肥星肽生物科技有限公司获得*上等服务！
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