miRNA质粒载体
MicroRNA（miRNA）是一类真核生物内源性的小分子单链RNA，通常长为18~25nt，能够通过与靶mRNA特异性的碱基配对结合，引起靶序列降解或抑制其翻译，从而对基因进行转录后的表达调控。
MicroRNA 表达载体构建
MicroRNA（miRNA）是一类真核生物内源性的小分子单链RNA，通常长为18~25nt，能够通过与靶mRNA特异性的碱基配对结合，引起靶序列降解或抑制其翻译，从而对基因进行转录后的表达调控（如右图所示）。SYNTHBIO MicroRNA载体利用CMV启动子可以在众多哺乳动物细胞中快速、高效、持续表达pre-miRNA，经过Drosha（RNaseⅢ）作用形成small hairpin pre-miRNAs（约70nt），再过Dicer作用形成成熟的microRNA（约22nt），作用靶mRNA，起到表达调控作用。
microRNA过表达载体
SYNTHBIO提供两种过表达的方式：
1. 从天然的基因组序列中表达pre-miRNA转录本构建pre-microRNA。插入序列不仅包含pre-miRNA茎环结构，同时构建100-200bp长的上下游两端的侧翼序列。使用使用pol-Ⅱ（如CMV）启动子，这种构建方式保证高水平的表达pre-microRNA。表达出来的pre-miRNA的生理活动尽可能接近天然状态。
使用这种构建方式，客户只需提供miRNA的具体信息及指定过表达载体类型（如SYNTHBIOpEX系列 M核过表达载体ﻉ，我们完成序列合成，质粒构建。
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目录号
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产品名称
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规格
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价格
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交货期限
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HSC09001
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质粒型microRNA 过表达载体-1
(pre-miRNA+flanking sequences, ~500bp)
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50μg
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￥2,500
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3-4周
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2. 利用SYNTHBIO优化过的载体，模拟内源miRNA-155的表达模块，这种构建方法解决了不同miRNA表达效率差异的问题，同时也有效的避免了有些内源miRNA表达时产生-3p，-5p的问题。miRNA的发夹序列融合在EGFP报告基因的后面，模拟miRNA在体内的成熟过程。
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SYNTHBIO microRNA载体元件信息及用途
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特征
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用途
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CMV promoter
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高表达目的基因
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EmGFP
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利用荧光显微镜观察转染效果
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Blasticidin resistance gene
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可用来筛选稳定细胞系
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Spectinomycin
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筛选含有已经转化质粒的E. coli
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pUC origin
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质粒可以在E. coli中进行高拷贝
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使用这种构建方式，客户只需提供miRNA的具体信息，我们完成序列合成，质粒构建。
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目录号
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产品名称
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规格
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价格
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交货期限
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HSC09002
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质粒型microRNA 过表达载体-2
(pGCMV/EGFP/miR/Blasticidin)
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50μg
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￥1,000
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2-3周
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备注：保证插入序列正确，不保证miRNA的过表达效率，不保证转染效率。所有实验仅供科研使用。
microRNA抑制子表达载体
SYNTHBIO提供两种miRNA抑制子载体构建的方式：
1. ;)PAN>利用SYNTHBIO优化过的载体，模拟内源miRNA-155的表达模块，来表达miRNA inhibitor序列。这种构建与SYNTHBIO miRNA过表达方式2使用同样的载体系统，方便客户使用同一套系统完成miRNA的过表达与抑制。
使用这种构建方式，客户只需提供miRNA的具体信息，我们完成序列合成，质粒构建。
miRNA sponge的特点：
a. 由于miR Sponges是由质粒编码的，它能够通过真核表达载体达到稳定沉默细胞microRNA的目的；
b. 能够沉默整个家族的microRNA以达到对整个家族microRNA功能的研究；
c. 可以利用miR Sponges实现体内外loss of function研究；
d. 可以用来检测luciferase靶基因报告系统分析；
e. 可以自由组合串联不同miRNA抑制子序列，达到沉默多种不同miRNA的目的。
使用这种构建方式，客户需提供miRNA的具体信息、预构建miRNA inhibitor的重复数及预构建inhibitor的序列信息，我们完成序列合成，质粒构建。
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目录号
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产品名称
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规格
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价格
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交货期限
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HSC09004
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质粒型microRNA 抑制子载体-2
(microRNA inhibitor sponge, 3重复)
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50μg
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￥1,500
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3周
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microRNA靶基因荧光素酶报告载体
SYNTHBIO采用Promega的psicheck2.0的载体系统完成靶基因3’ UTR质粒载体构建服务。可提供基于人、小鼠、大鼠基因的UTR构建。
psicheck2.0报告基因检测系统用来检测siRNA/miRNA与靶基因是否可能存在调控作用，该报告系统报告荧光(hRluc)，其下游构建了靶基因3’UTR区域，通过对该荧光的监测，即可验证siRNA/miRNA对该靶标是否有调控作用；另有一校正荧光(hluc) 作为稳定内参，用于监测质粒表达效率。
严格的实验体系，要求miRNA与mRNA 3’ UTR验证实验中需要构建靶mRNA的点突变载体，以验证靶点作用有效性。突变载体构建主要依据预测的miRNA与靶基因3’UTR的稳定结合区域(即种子区)。通过种子区全部碱基或部分碱基突变导致miRNA与靶基因3’UTR区域的结合能力大大降低，从而判断是否存在miRNA的调控作用。
完成miRNA靶基因报告基因载体构建，需要客户提供：miRNA具体信息，预测靶基因信息，miRNA与靶mRNA结合位点信息。
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目录号
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产品名称
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规格
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价格
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交货期限
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HSC08005
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双荧光素酶报告实验载体构建(≤500bp)a
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50μg
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￥2,500
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3-4周
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HSC08006
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双荧光素酶报告实验突变载体构建（种子区突变）b
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50μg
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￥2,500
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3-4周
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注：
a. 靶基因3’ UTR长度须小于500bp，否则价格及合成周期另计；
b. 单位点(即1个miRNA-mRNA作用位点) 突变价格如上，多位点突变价格及合成周期另计。
Lentivirus microRNA表达载体
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目录号
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产品名称
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规格
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价格
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交货期限
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HSC06001
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慢病毒干扰载体 LV-1 (pGLVU6/GFP)
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50μg
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询价
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2周
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HSC06002
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慢病毒干扰载体 LV-2 (pGLVU6/Puro)
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50μg
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2周
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HSC06003
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慢病毒干扰载体 LV-3 (pGLVH1/GFP+Puro)
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50μg
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询价
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2周
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HSC06004
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慢病毒干扰载体 LV-9 (pGLVU6/RFP)
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50μg
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询价
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2周
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SYNTHBIO microRNA 过表达载体库
SYNTHBIO公司已经利用自己的miRNA载体骨架成功构建为数众多的miRNA的过表达载体，载体库中的miRNA expression vectors 1周之内即可出货，价格更优。
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目录号
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产品名称
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规格
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价格
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交货期限
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HSC09003
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质粒型microRNA 抑制子载体-1
(pGCMV/EGFP/miR/Blasticidin)
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50μg
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￥1,000
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2-3周
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2. miRNA sponge（海绵）载体构建：SYNTHBIO通过构建载体，表达包含多个成熟miRNA结合位点的RNA序列，通过吸附结合成熟miRNA，从而抑制miRNA的作用，从而进行功能缺失性研究。
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